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La présente Ligne directrice (LD) décrit un essai de dépistage à court terme de l’activité de l’hormone juvénile (JH) faisant appel à Daphnia magna en vue de détecter les produits chimiques ayant un potentiel d’activité analogue à l’hormone juvénile. L’essai JHASA est un essai de dépistage conçu pour évaluer la production de descendants mâles chez les daphnies d’origine parthénogénétique.

La présente Ligne directrice relative à l’essai REACTIV (Rapid Estrogen ACTivity In Vivo) décrit un essai aquatique faisant appel à des éleuthéroembryons d’Oryzias latipes (médaka japonais) transgénique au jour zéro après éclosion, dans un format multipuits, afin d’identifier les produits chimiques agissant sur l’axe œstrogénique. La méthode REACTIV a été conçue comme un outil de dépistage assurant un débit moyen pour des essais à court terme visant à mesurer la réponse d’éleuthéroembryons à des produits chimiques potentiellement actifs sur l’axe œstrogénique.

L’essai de bioconcentration sur Hyalella Azteca est un test utilisant des organismes non-vertébrés pour la bioconcentration dans les environnements aquatiques. L’essai se décompose en deux phases : l’exposition (absorption) et la post-exposition (élimination). Pendant la phase d’absorption, un groupe de H. azteca est exposé au produit chimique d’essai à une ou plusieurs concentrations choisies. Il est ensuite transféré dans un milieu dépourvu de produit chimique d’essai et la phase d’élimination commence. La concentration du produit chimique d’essai dans et sur les H. azteca analysés est suivie pendant les deux phases de l’essai. Les paramètres qui caractérisent le potentiel de bioaccumulation sont la constante cinétique d’absorption (k1), la constante cinétique d’élimination (k2), le facteur de bioconcentration à l’état stationnaire (FBCES) et le facteur de bioconcentration cinétique (FBCK).

L’Essai de stimulation locale des ganglions lymphatiques: BrdU-ELISA (ELGL: BrdU-ELISA) est une variante non radioactive de la méthode ELGL qui vise à identifier les substances chimiques sensibilisantes et à mesurer la prolifération lymphocytaire qu’ils induisent dans les ganglions lymphatiques auriculaires. Cette méthode décrite chez la souris  se base sur la quantification de la 5-bromo-2- désoxyuridine (BrdU), un analogue of thymidine, dans l’ADN des lymphocytes, comme indicateur de cette prolifération. Quatre animaux au minimum sont employés par groupe de dose, avec au minimum trois concentrations de la substance d'essai, plus un groupe contrôle négatif traité avec le véhicule seul, et un contrôle positif, au besoin. Le protocole expérimental dure 6 jours. Ensuite, les animaux sont euthanasiés et une suspension unicellulaire de cellules de ganglions lymphatiques (CGL) est préparée. La procédure de dispersion des CGL est une étape cruciale, en particulier pour les ganglions lymphocytaires très petits chez le animaux du groupe contrôle négatif. Ensuite la BrdU dans l’ADN des lymphocytes est quantifiée à l’aide d’un kit de dosage ELISA ou par cytométrie de flux (FCM). L’essai inclut des mesures (pesée, BrdU) et des observations cliniques quotidiennes. Les résultats sont exprimés par l’Indice de Stimulation (IS) obtenu par calcul à partir des indices moyens de marquage BrdU pour les différents groupes. Un SI ≥1.6 pour la méthode ELISA ou un SI ≥2.7 pour la cytométrie de flux justifie l’évaluation de la substance d’essai comme sensibilisant potentiel.

La présente Ligne directrice (LD) pour les essais de produits chimiques fondée sur les événements clés porte sur le danger de sensibilisation cutanée pour la santé humaine après une exposition à un produit chimique. La sensibilisation cutanée fait référence à une réponse allergique après un contact avec la peau, selon la définition du Système général harmonisé de classification et d'étiquetage des produits chimiques (SGH) des Nations Unies. Cette LD porte plus particulièrement sur l’activation des cellules dendritiques, qui est un événement clé de la voie toxicologique impliquée dans les effets indésirables (AOP) pour la sensibilisation cutanée. La présente LD décrit quatre méthodes in vitro portant sur le même événement clé : (i) le test d’activation de la lignée cellulaire humaine (h-CLAT), (ii) le test d’activation de la lignée cellulaire U937 (U-SENS), (iii) l’essai par gène rapporteur de l’interleukine 8 (essai IL 8 Luc) et (iv) l’essai de détection génomique rapide des allergènes pour l’évaluation des sensibilisants cutanés (GARD™skin). Les méthodes décrites dans la présente LD permettent de quantifier soit les variations d’expression de marqueurs de surface associés au processus d’activation des monocytes et des DC suite à l’exposition à un sensibilisant (CD54 et CD86, par exemple), soit les changements d’expression de l’IL 8, une cytokine associée à l’activation des DC, soit une série de gènes (signature de marqueurs génomiques) qui sont associés avec le processus d’activation des monocytes et des cellules dendritiques faisant suite à l’exposition à des sensibilisants. Elles sont toutes utilisées pour aider à distinguer les sensibilisants des non-sensibilisants cutanés, selon le SGH.

Cette méthode fournit des informations sur les dangers pour la santé qui peuvent résulter d’une exposition à court terme à un article d’essai (gaz, produit volatil, aérosol, substance particulaire) par inhalation. La ligne directrice révisée décrit deux études : un protocole traditionnel (CL50) et un protocole « concentration x temps ». Elle peut être utilisée pour estimer une concentration létale médiane (CL50), une concentration seuil non létale (LC01), et une pente, et pour identifier des susceptibilités possibles liées au sexe. Elle permet une évaluation quantitative des risques et une classification selon le selon le Système général harmonisé de classification et d’étiquetage des produits chimiques. Dans le protocole traditionnel, les animaux sont exposés à une concentration limite, ou à  trois concentrations au moins, pour une durée prédéterminée, en principe 4 heures. En général, 10 animaux sont utilisés pour chaque concentration. Dans le protocole CxT, les animaux sont exposés à une concentration limite ou à une série de concentrations pour des durées multiples. En général, 2 animaux sont utilisés pour chaque CxT. La durée d’observation des animaux (rats de préférence) est d’au moins 14 jours. L’étude comprend des  mesures dont celle du poids, des observations quotidiennes détaillées, et une autopsie générale.

La présente Ligne directrice fondée sur les événements clés porte sur le danger de sensibilisation cutanée pour la santé humaine faisant suite à une exposition avec un produit chimique. La sensibilisation cutanée fait référence à une réponse allergique après un contact avec la peau, selon la définition du Système général harmonisé de classification et d'étiquetage des produits chimiques (SGH) des Nations Unies. La présente Ligne directrice (LD) est proposée pour l'étude d’un événement clé menant à la sensibilisation cutanée, nommément l’activation des kératinocytes. Ce deuxième événement clé sur la voie toxicologique menant à la sensibilisation cutanée se déroule dans les kératinocytes. Cet événement comprend des réponses inflammatoires et des phénomènes d'expression génique, liés à des voies de signalisation cellulaire spécifiques telles que les voies dépendant de l'élément de réponse antioxydant/électrophile (ARE, Antioxidant Response Element). La présente LD décrit trois méthodes in vitro portant sur le même événement clé : (i) la méthode d’essai ARE-Nrf2 luciférase KeratinoSensTM ; la méthode d’essai ARE-Nrf2 luciférase LuSens ; la méthode d’essai de sensibilisation cutanée EpiSensA. Les méthodes d'essai KeratinoSens et LuSens sont des méthodes in vitro basées sur l’ARE-Nrf2 luciférase et la méthode d’essai EpiSensA est basée sur la quantifiant de l’expression des gènes au moyen de la réaction de PCR quantitative après transcription inverse sur modèle d’épiderme humain reconstitué. Les méthodes proposées sont utilisées pour aider à distinguer les sensibilisants des non-sensibilisants cutanés, selon le SGH.